三聚氰胺檢測液相色譜儀固相萃取法

       三聚氰胺，俗稱密胺、蛋白精，是一種重要的化工原料，沒有任何營養(yǎng)價值，是國家禁止在食品或飼料中使用的添加物，但因其含氮量高達66%，被一些造假者利用，添加在飼料或食品中，造成蛋白質(zhì)含量高的假象，以獲得更*，如果蛋雞長期食用含有三聚氰胺的飼料，會導致雞蛋中殘留三聚氰胺。研究表明，三聚氰胺會造成生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱以及腎部的結(jié)石，并可進一步誘發(fā)膀胱癌。

三聚氰胺檢測液相色譜儀固相萃取法主要儀器設(shè)備

液相色譜儀，紫外檢測器，SPE固相萃取裝置，渦旋振蕩儀，氮氣吹干儀，真空泵，高速離心機，電子天平。

試劑材料

市售巧克力，三聚氰胺標品，乙腈（色譜純），甲酸、氨水、甲醇、庚烷磺酸鈉、檸檬酸（均為分析純）。

色譜柱：ATEO-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，

SPE柱：AE.SPE-MCX（60 mg/3 mL）

三聚氰胺檢測液相色譜儀固相萃取法樣品提取

      取5 g粉碎巧克力樣品，加入20 mL 50%乙腈水溶液混合，渦旋振蕩10 min，6000 r/min 離心5 min，取上清液待凈化。

SPE柱凈化

（1）活化：分別用3 mL甲醇、3 mL 4%甲酸水活化固相萃取柱。

（2）上樣：將提取液加入小柱中，以≦1 mL/min的流速過柱，棄去濾液。

（3）淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液棄去。

（4）洗脫：用3 mL 5%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。

（5）重新溶解：50℃下氮吹吹干后，用20% 甲醇水溶液溶解并定容至1 mL，0.45μm濾膜過濾，供HPLC檢測。

液相色譜條件

色譜柱：ATEO-C18（250 * 4.6 mm，5 μm）

檢測器：UV2996型紫外/可見光檢測器

檢測波長：UV 240 nm                

流動相：緩沖溶液*/乙腈 = 92/8（v/v）          

流速：1.0 mL/min

柱溫：30 ℃                 

進樣量：20 μL

緩沖溶液：分別稱取2.02 g庚烷磺酸鈉、2.10 g檸檬酸鈉，用水定容至1 L。

三聚氰胺檢測液相色譜儀固相萃取法分析結(jié)果

      采用，添加回收率達92.27%，表明使用AE.SPE-MCX固相萃取柱及ATEO-C18柱，可快速可靠地檢測巧克力中的三聚氰胺。